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PCR試劑 SYBR Green I核酸染料（PCR級，10000X）
貨號：SR4110
規(guī)格：50/100ul
保存：-20℃避光保存，有效期少一年。

產品說明 ：
    SYBR Green I 染料是一種直接與雙鏈 DNA (dsDNA) 結合的熒光染料，是熒光定量 PCR 常用的 DNA結合染料。在定量 PCR 中，SYBR Green I 可與雙鏈 DNA（dsDNA）非特異性結合后發(fā)出熒光，則可以通過檢測反應體系中的 SYBR Green I 熒光強度，達到檢測 PCR 產物擴增量的目的。游離狀態(tài)下，SYBR Green I 發(fā)出微弱的熒光，一旦與 dsDNA 結合，其熒光增加 1000 倍，一個反應發(fā)出的全部熒光信號與出現(xiàn)的 dsDNA 量成比例，且會隨擴增產物的增加而增加；所以通過檢測 PCR 反應液中的熒光信號強度，可以對目的基因進行準確定量，同時還可以測定擴增的目的 DNA 段的熔解溫度。

使用說明 ：
    使用時，配置PCR反應混合液， 將10000×SYBR Green I濃縮液加入到PCR反應體系， 使終濃度為0.5× （0.2×到 1×之間調整） 。以上操作建議在冰上進行。
注： ① 反應液配制方法和 PCR 擴增條件請參照 DNA 聚合酶使用說明。
     ② Realtime PCR 擴增儀的使用方法，請參照各儀器說明書。

注意事項 ：
    使用濃度對熒光 PCR 結果的影響
    SYBR Green I 的使用濃度是保證熒光定量 PCR 實驗成功非常關鍵的因素。如果 SYBR Green I 的濃度過低會使熒光信號的變化降低，這就意味著低拷貝的樣品可能無法檢出；而在高濃度時，將會抑制 PCR 反應，降低PCR 反應效率。所以一般在使用 SYBR Green I 時應根據(jù)實際情況優(yōu)化使用濃度，反應的終濃度為 0.2×到 1×之間。
    鎂離子濃度的影響
    提高鎂離子濃度可以降低SYBR Green I對PCR反應的抑制作用。 我們建議在用SYBR Green I進行熒光PCR反應時，鎂離子濃度比無 SYBR Green I 的普通 PCR 反應高出 0.5～3mM。

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 SYBR Green I是高靈敏的DNA熒光染料，適用于各種電泳分析，操作簡單：無須脫色或沖洗。少可檢出20pg DNA，高于EB染色法25-100倍。SYBR Green I 與dsDNA 結合熒光信號會增強800-1000倍，用SYBR Green I染色的凝膠樣品熒光信號強，背景信號低。可適用于多種電泳分析。
用QPCR來做miRNA的擴增其實是一件比較難的事，因為miRNA是只有18-23個堿基的單鏈RNA，普通的PCR擴增方法是無法直接用的，所以目前有兩種主流的解決思路：
方法1、設計頸環(huán)引物，反轉錄得到cDNA，然后結合探針的方法在PCR擴增時進行熒光定量，這種方法以ABI公司為代表，優(yōu)點是擴增特異性好，缺點是成本太高，所以ABI的miRNA技術服務是很貴的 
方法2、通過在miRNA 3‘端進行加A，以延長片段的長度，然后通過特殊設計的RT引物反轉錄得到cDNA，后用SYBR為熒光染料進行定量PCR，此法優(yōu)點是價格便宜，操作簡單，靈敏度高，尤其對低豐度miRNA的檢測要明顯優(yōu)于探針法；缺點是特異性稍差，不過近研究發(fā)現(xiàn)miRNA 的3’端有多樣性。
總的來說方法2要好于方法1 ，因為一旦miRNA 3‘端增加或減少一兩個堿基，頸環(huán)引物則無法使用，也就是說方法1只能檢測某種miRNA的一種序列。

PCR試劑 SYBR Green I核酸染料（PCR級，10000X）

 參考文獻：
《Regulation of insulin resistance by targeting the insulin‐like growth factor 1 receptor with microRNA‐122‐5p in hepatic cells》 作者:Li Dong，Xiaoyu Hou，F(xiàn)engsui Liu，Hong Tao，Yunjia Zhang，Hang Zhao，Guangyao Song 期刊:Cell Biology International 影響因子:2.127 PMID:30958584
《Collagen facilitates the colorectal cancer stemness and metastasis through an integrin/PI3K/AKT/Snail signaling pathway》 作者:Xiangbin Wu，Jianhui Cai，Zhigui Zuo，Jinlei Li 期刊:Biomedicine & Pharmacotherapy 影響因子:3.743 PMID:30913493
《MMP-9 secreted by tumor associated macrophages promoted gastric cancer metastasis through a PI3K/AKT/Snail pathway》 作者:Liu Lin，Yu Ye，Xiumei Zhu 期刊:Biomedicine & Pharmacotherapy 影響因子:3.743 PMID:31202170